PRACTICA PREANALITICA

Práctica-1 Operar equipo y material de laboratorio así como elaborar medios de cultivo.

Practica-2 Elaborar medio de cultivo.

Practica-3 Esterilización d medio de cultivo.

Práctica-4 Siembras en estría de medio de cultivo.

Practica-5 Observación de desarrollo de microorganismos en medio de cultivo, lectura de colonias.

Practica-6 Protis para tinción.

Practica-7 Tinción de Gram

Practica-8 Observación microscópica en objetivos 100X con aceite de inmersiónPractica-9Prueba de reacciones febriles para prueba de aglutinación en serología tubo son anti coagulo (rojo)Prueba de aglutinación en sangre fresca utilizando tuvo coagulante (morado)

PRUEBA DE AGLUTINACION

materiales:

Laminilla de cristal para reacciones febriles

Tubo de ensayo con tapón rojo estéril

Palillos de Madera

Torundas de algodon alcoholizadas

Centrifuga

Microscopio

Pipeta Pasteur con bulbo

Papel secante

Torniquete

REACTIVO:

Febriclin (H, O, A, B, BRUCELLA, PROTEUS)

1.-“Paciente” sangre fresco-Hoja de solicitud (medico)

2.- Hoja de orden de laboratorio

3.-Indicaciones de laboratorio (Paciente)- Folio de registro “inmunologia” (salmonella, brucella. Proteus)

Análisis :

-Técnica de extracción de sangre (ven pulsión)

-Separación del paquete sanguíneo y plasma

-Punteo de plasma en placa de cristal

-Mezclar plasma con reactivo de febriclin para observar la reacción de aglutinación

-Observar microscópicamente la laminilla trasluz

-Observar microscópicamente el proceso de aglutinación en objetivo 10 y 40 X

-Reportar en hoja de laboratorio

CLASIFICACION DE LAS TINCIONES

La tinción de Gram o coloración Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa.

La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, para la identificación de mocroorganismos patógenos, por ejemplo M. tuberculosis.

Este método se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR. Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia.

La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.

En una tinción directa el colorante interacciona directamente con el sustrato. En una tinción indirecta se hace interaccionar en primer lugar a una sustancia química denominada "mordiente" con el sustrato la cual permite la posterior interacción del colorante. Usualmente los mordientes son sales, hidróxidos o alumbres de metales bivalentes o trivalentes.

· Tinciones simples:
tinción negativa: se usa un colorante ácido, nigrosina o tinta china, que no entra en la célula de modo que estas no se observan teñidas, lo que se ve de color es el fondo.
Frotis.
Secado al aire
Colorante.
Visionado a 100X
tinción básica: se usa azul de metileno que si tiñe a las células.
Frotis.
Fijación.
Colorante.
Lavado con agua destilada.
Secado al aire.
Visionado a 100X.

Tinciones diferenciales:

tinción Gram: se basa en las diferencias entre las paredes de las Gram + y las Gram - , el primer colorante tiñe todas las células, en las G+ entra y con la acción del lugol formara una molécula muy grande que no sale de la célula, pero el disolvente, etanol, disolverá la capa d lipopolisacaridos de las Gram negativas donde esta el 1º colorante, ya que no pudo atravesar esta barrera, de modo que al añadir el 2º será este el único que les de color.
Extensión.
Fijación.
Colorante básico, cristal violeta, entra en las células.
Lavado con agua destilada.
Mordiente, lugol: el colorante básico ya no puede salir de G+.
Lavado con etanol que disuelve la capa de lipopolisacaridos de G- donde esta el 1º colorante.
Colorante de contraste básico, safranina o rojo metilo . que tiñe a las G-.

Azul de metileno (Tinción positiva):
Permite teñir el interior celular. Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.

El azul de metileno se usa como tintura para teñir ciertas partes del cuerpo antes o durante la cirugía. Su uso es principalmente como antiséptico y cicatrizador interno. También se utiliza como colorante en las tinciones para la observación en el microscopio.

TINCION

Las tinciones se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no ha muerto el proceso termina de hacerlo. El método, por consiguiente, es bastante drástico y puede producir artificios.

Las tinciones mas frecuente son sales. Las tinciones básicas consiste en un catión coloreado unido a un anión incoloro, mientras las ácidas constituyen exactamente lo contrario, unido a dos cationes. Las células bacterianas son abundantes en ácidos nucleicos, los cuales portan cargas negativas en formas de fosfatos.

Los colorantes ácidos no tiñen a las células bacterias, y por tanto, pueden utilizarse para teñir al fondo con un color de contraste.

Las tinciones básicas tiñen uniformemente en las células bacterianas, a menos que antes de destruyan el ARN del citoplasma. También se pueden usar técnicas de tinción especiales para flagelos, membranas celulares, paredes celulares, gránulos, nucleótidos y esporas.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS ENRIQUECIDOS
Algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en medios de cultivo normales. Para cultivarlos necesitamos añadir sustancias altamente nutritivas como sangre, suero, extractos de tejidos animales.

MEDIOS SELECTIVOS
Contienen uno o varios compuestos que inhiben el crecimiento de un determinado tipo de microorganismos y no afectan a otros tipos. Otra manera es modificar la fuente de carbono; si sustituimos la glucosa por maltosa, seleccionamos aquellos microorganismos capaces de digerirla.

MEDIOS DIFERENCIALES
Contienen distintos compuestos químicos o indicadores sobre los que determinados microorganismos adquiere coloraciones específicas o reaccionan de una manera determinada.

MEDIOS SELECTIVOS Y DIFERENCIALES
Se usa para detectar E. Coli y Salmonella. E. Coli es tolerante a la lactosa. Al digerirla, libera ácidos, por lo que se crea un medio ácido y el indicador se pone rojo. Salmonella no tolera la lactosa, por lo que no formará ácidos y formará colonias incoloras.

CULTIVOS PUROS:

MEDIOS DE OBTENCIÓN
Los microorganismos en estado natural crecen de forma heterogénea o mixta. Cuando queremos estudiar un microorganismo dado, debemos aislarlo. Un cultivo puro es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo.

SIEMBRAS

Sembrar es introducir artificialmente una porción de muestra en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento. La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando punta, ansa, hisopo o pipeta estéril.

Cultivo en medio líquido:
Se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento.

Cultivo en medio sólido:
Puede ser en tubos o placas.

a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.

b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura.

c) Siembra en placas. Puede ser en superficie o incorporada.

MEDIO DE CULTIVO

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licua completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados.

Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación.

BRUCELLA ABORTUS

B. abortus es una bacteria Gram negativa con un lipopolisacárido (LPS) fuertemente inmunodominante, el que junto con la capacidad de sobrevivir en el interior de células fagocíticas constituyen sus principales factores de virulencia.

La infección en humanos conduce a una enfermedad con tendencia a la cronicidad, con fiebre y malestar recurrentes que deterioran su calidad de vida y que además puede presentar complicaciones como artritis, meningitis, entre otras.

PROTEUS

Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes antigénos idiotípicos con Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relación se usó en el diagnóstico de tifo.

Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequeños plemórfos que funcionan como parásitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga duración, con algunas excepciones.

El tifus endémico puede causar recaíadas 10 o 20 años después de la aparente recuperación (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de las trincheras se caracteriza por las recaídas.

SALMONELLA TYPHI

Forma de barra, no espongiforme y Gram negativa. Está presente muy frecuentemente en los animales, especialmente en las aves y los porcinos. Entre las fuentes ambientales de este organismo se incluyen el agua, el suelo, los insectos, las superficies de las fábricas, las superficies de las cocinas, las heces fecales de los animales, las carnes crudas, el pollo crudo, los productos marinos crudos, entre otros.

ESCHERICHIA COLI

Las bacterias del género E. coli son Gram-negativas, tienen forma de barra y pertenecen a la familia Enterobacteriaceae. Esta bacteria es un habitante común de los intestinos de todos los animales, incluyendo el de los humanos. Cuando se usan métodos de cultivos aeróbicos, esta bacteria es la especie dominante encontrada en las heces.

Normalmente cumple una función importante en el cuerpo, suprimiendo el crecimiento de especies dañinas de bacterias así como también sintetizando cantidades apreciables de vitaminas. Son pocas las cepas de E. coli capaces de causar enfermedades a los humanos a través de diferentes mecanismos. Entre ellas están las cepas enteroinvasivas (EIEC) responsables de una forma de la disentería bacilar. No obstante, es desconocido aún el tipo de alimentos que pueden hospedar a estas bacterias patogénicas

PARAMECIO

Los paramecios género Paramecium son protozoos ciliados con forma de suela de zapato o elipsoide, habituales en aguas dulces estancadas con abundante materia orgánica, como charcos y estanques. Son probablemente los seres unicelulares mejor conocidos y los protozoos ciliados más estudiados por la Ciencia. El tamaño ordinario de todas las especies de paramecios es de apenas 0'05 milímetros.

Carecen de flagelos, pero los cilios son muy abundantes y recubren toda su superficie. A ellos les corresponde proporcionar movimiento al organismo. La membrana externa absorbe y expulsa regularmente el agua del exterior con el fin de controlar la osmorregulación, proceso dirigido por dos vacuolas contráctiles.
En su anatomía destaca el citostoma, una especie de invaginación situada a todo lo largo del paramecio de la que éste se sirve para capturar el alimento, conformado por partículas orgánicas flotantes y microorganismos menores.

El citostoma conduce a una citofaringe antes de que el alimento pase al interior de este protozoo. Otros orgánulos de fácil observación son el núcleo eucariota, situado junto a un "micronúcleo" en el centro del paramecio, y las vacuolas digestivas, que digieren constantemente el alimento capturado. Los desechos se expulsan por exocitosis, mediante vacuolas de secreción que se originan a partir de las digestivas.

Como muchos otros microorganismos, los paramecios se reproducen asexualmente por fisión binaria.

PRACTICA #3 PIPETEO

OBJETIVO:
Saber cuantos ml. Tienen las pipetas y aprender a pipetear, colocando el agua en la probeta para saber si es la misma cantidad de agua en la pipeta y probeta.

INTRODUCCION:
Este trabajo trata sobre la practica que realizamos con el fin de pipetear y saber la cantidad que caben en cada pipeta y a cuanto equivale cada pipeta y su cantidad.

INDICE:
Objetivo-------------1
Introducción---------2
Índice----------------3
Marco teorico--------4
Bitácora--------------5
Conclusión-----------6

MARCO TEORICO:
En esta practica utilizamos cuatro pipetas las cuales eran la pipeta automática, la pipeta volumétrica, la graduada y la de pasteur.

La practica consistió en tomar una cantidad de agua y ponerla en una probeta para saber si equivale lo mismo.

Cuando trabajamos con la pipeta de pasteur queríamos ver a cuanto equivale una gota de la pipeta de pasteur y nos dimos cuenta que equivale a 5 microlitros ya que los estuvimos comprobando con la pipeta automática.

BITACORA:
ACTIVIDADES
TIEMPO
Entrada al laboratorio
5 min.
Poner equipo de bioseguridad
10 min.
Instrucciones
10 min.
Tomar el material
5 min.
Pipeteo
65 min.
Devolver el material
5 min.

CONCLUSION:
Esta practica me gusto porque vimos cuanta agua le cabe a cada pipeta y a cuanto equivale pero a la vez me di temor al inicio de la practica al ir utilizando las pipetas pero después agarre confianza y trabaje mejor.

CUESTIONARIO PIE DE REY

1.- Es un instrumento para medir dimensiones de objetos relativamente pequeños, Se atribuye al cosmógrafo y matemático portugués que se llama:
Pedro Núñez, pie de rey



2.- En qué año se le atribuye el pie de rey al cosmógrafo y matemático portugués.
1492-1577



3.- También se ha llamado pie de rey al:
Vernier



4.- En qué año se le atribuye el pie de rey al geómetra Pedro Vernier.
1580-1637



5.- ¿Qué otro nombre recibe el origen del pie de rey?


Nonio

:::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::::
R: Nombre: PIE DE REY

En los recuadros siguientes ponga el número y nombre correspondiente de la figura de medición

1
MORDAZAS PARA MEDIDAS EXTERNAS
2
MORDAZAS PARA MEDIDAS INTERNAS
3
COLIZA PARA MEDIR PROFUNDIDADES
4
ESCALA CON DIVISIONES EN CM. Y MM.
5
ESCALA CON DIVISIONES PULGADAS FRACCIONES DE PULGADA
6
NONIO PARA LA LECTURA DE FRACCIONES DE MILIMETROS
7
NONIO PARA LA LECTURA DE FRACCIONES DE PULGADA
8
BOTON DE DESLIZAMIENTO Y FRENO

Descripción del Pie de Rey o Vernier. 121 palabras utilizaras para su descripción.

Consta de una "regla" con una escuadra en un extremo, sobre la cual se desliza otra destinada a indicar la medida en una escala. Permite apreciar longitudes de 1/10, 1/20 y 1/50 de milímetro utilizando el nonio. Mediante piezas especiales en la parte superior y en su extremo, permite medir dimensiones internas y profundidades. Posee dos escalas: la inferior milimétrica y la superior en pulgadas. Mordazas para medidas externas. Mordazas para medidas internas. Coliza para medida de profundidades. Escala con divisiones en centímetros y milímetros. Escala con divisiones en pulgadas y fracciones de pulgada. Nonio para la lectura de las fracciones de milímetros en que esté dividido. Nonio para la lectura de las fracciones de pulgada en que esté dividido. Botón de deslizamiento y freno.

PIE DE REY

El calibre también denominado cartabón de cordero, pie de rey, pie de metro, pie a colisa o vernier, es un instrumento para medir dimensiones de objetos relativamente pequeños, desde cm. Hasta fracciones de milímetros.

En la escala de pulgadas tiene divisiones equivalentes a 1/16 de pulgada y en su nonio de 1/28 de pulgadas.

Es un instrumento sumamente delicado y debe maniobrarse con habilidad cuidado y delicadeza, con precaución de no rayarlo ni doblarlo (en especial la colisa de profundidad)

BACILO GRAM (-)

SALMONELLA: es un género de bacteria que pertenece a la familia entero bacteriácea, formado por bacilos gram negativos no desarrollan capsulo ni esporas.
Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos en el hogar.


BRUCELLA: bacterias gran negativas. Son cocobacilos pequeños no móviles y encapsulados
Metilenses infecta cabras y ovejas
Abortas infecta vacas
Suis infecta cerdos
Ovis infecta ovejas
Es transmitida por la ingestión de comida infectada, contacto directo con u animal infectado por inhalación de aerosoles.



PROTEUS OX19:
Es un género de bacteria gran negativa, que incluye patógenos responsables de muchas infecciones del tracto urinario. Las especies de proteus normalmente no fermentan lactosa por razón de tener una b balactosidad pero algunas han demostrado capaces de hacerlo. Tienden hacer organismos pleomorficos, no espulorados, ni capsulados son productores de fenilalanina de saninasa.

PRACTICA #2 PESOS Y MEDIDAS

PESOS Y MEDIDAS

OBJETIVO:
En esta práctica el objetivo era saber el peso correcto de cada material, también así saber cuánto puede contener el material y cuál es su capacidad de acuerdo a cada material.

INTRODUCCION:
En esta práctica pesamos algunos materiales de cristalería los cuales los anotamos en hojas para después utilizarlos con alguna sustancia solida saber cuál es el peso exacto solo de la sustancia.
Así hicimos unas operaciones para poder re hidratar un medio de cultivo con varias medidas.

INDICE:
Objetivo--------------1
Introducción---------2
Índice----------------3
Marco teórico--------4
Bitácora--------------5
Conclusión-----------6

MARCO TEORICO:
Cajas de Petri:
Medida: 19 a 25 ml
Peso: 86.08 gr

Vaso Precipitado:
Medida: 500 ml
Peso: 121.2 gr

Vidrio de Reloj:
Peso: 19.5 gr

Pipeta Graduada:
Medida: 10ml/10
Peso: 15.2 gr

Pipeta Volumétrica:
Medida: 5ml
Peso: 15.63gr

Laminilla escavada:
Peso: 30.07 gr

Pipeta
Medida: 100ml
Peso: 0.06 gr

Probeta Graduada:
Medida: 100 ml
Peso: 63.06 gr

Vaso Precipitado:
Medida: 50 ml
Peso: 28.05 gr

Espátula:
Peso: 8.08 gr

Tubo de ensayo:
Peso: 8.03 gr

Cristalizador:
Peso: 53.03 gr

Pipeta de salí:
Medida: 20 cm
Peso: 0.04 gr

BITACORA:
ACTIVIDADES
TIEMPO
Ponerse equipo de bioseguridad
10 min.
Instrucciones del profesor
20 min.
Pesar los materiales
1 hora 30 min.

CONCLUSION:
En esta práctica se me hizo divertido al estar pesando los materiales pero a la vez me daba miedo de que algún instrumento se dañara o rompiera.
Pero fui adquiriendo confianza y logramos pesarlos para luego empezar con el medio de cultivo.

BACTERIAS DEL MEDIO DE CULTIVO

Tipos de bacterias que crecen en los medios de cultivo.
Algunas de las especies bacterianas comunes que producen y retienen pigmento intracelular son:
Serratia marcencens rojo
Chromobacterium violaceum violeta
Stathy lococcus aureus amarillo dorado
Sarcino luteo amarillo limón
Microccus flovus amarillo
m. Níger pardo oscuro

algunas de las bacterias que producen pigmento y excretan el medio son:
pseudomanos chlororaphis verdoso-amarillo
p. fluorescens verdoso-café oliva
p. aeruginosa verde, azul-café oscuro

CAMARA DE NEUBAUER

Observe que en la grilla de la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes. Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. Ten en cuenta que la grilla central tiene 25 cuadrados de 1mm x 1mm de área y 0.10 mm de profundidad. El factor de dilución es por tanto de 1:200. Convierte el número de glóbulos rojos contados en 5 cuadrados a nº glóbulos rojos/µl. (1 µl (microlitro) = 1 mm3 )

TÉCNICAS DE CONTAJE CELULAR

Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables.
Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que empleamos (cámara de Neubauer), hasta equipos automáticos de contaje celular como el "Cell Coulter" de la empresa Beckman-Coulter.
El principio del contador celular se basa en la medida de los cambios en la resistencia eléctrica que se producen cuando una partícula no conductora en suspensión en un electrolito atraviesa un pequeño orificio. Como se puede ver en el esquema, una pequeña abertura entre los electrodos es la zona sensible a través de la que pasan las partículas que se encuentran en suspensión. Cuando una partícula atraviesa el orificio desplaza su propio volumen de electrolito. El volumen desplazado es medido como un pulso de voltaje. La altura de cada pulso es proporcional al volumen de la partícula. controlando la cantidad de la suspensión que circula a través del orificio es posible contar y medir el tamaño de las partículas. Es posible contar y medir varios miles de partículas por segundo, independientemente de su forma, color y densidad.



En la unidad de Citometría de flujo y Microscopia Confocal de los Servicios Científico-Técnicos de la Universidad de Barcelona se dispone de contadores celulares.
Sin embargo, es posible determinar la densidad celular empleando métodos más sencillos. Nos basta con una cámara de contaje celular, por ej. la cámara de Neubauer, y un microscopio. Una cámara de contaje celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la suspensión a medir. El dispositivo presenta unas señales que determinan un volumen conocido (x microlitros). Al contar bajo el microscopio el número de partículas presentes en ese volumen se puede determinar la densidad de partículas en la suspensión de origen.
La cámara de Neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos lineas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milimetro cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.
Si contamos las cuatro áreas sombreada (L) observando un total de x células entre las cuatro áreas, la concentración en la suspensión celular será :
concentración en la suspensión (células / mL) = 10000 (x/4)
En la imagen puedes observar el aspecto de una de las regiones marcadas como L y que en el microscopio se ven como una cuadrícula de 16 pequeños cuadrados de 0.25 milímetros de lado. Esta imagen ha sido tomada empleando un microscopio invertido de contraste de fases.
Existen numerosos modelos de cámaras de contaje celular adaptadas a su uso en microscopía. En la imagen puedes observar una cámara de Neubauer doble, como las que usas en el laboratorio de prácticas.
Para determinar la viabilidad celular se emplean diferentes métodos. El más común es el de tinción con azul tripán. El azul tripán es un coloide que se introduce en el interior de las células que presentan roturas en la membrana. Así pues las células que aparecen en la imagen, claramente de color azul, son consideradas no viables. Asimilar células blancas, por exclusión, a células viables es un error pues por este método se sobrevalora la viabilidad de las células en la suspensión, determinando como inviables sólo aquellas con la membrana rota. Existen otros métodos de determinación de la viabilidad celular como el más preciso de la tinción con ioduro de propidio
En la red dispones de descripciones detalladas sobre como utilizar un hemocitómetro, como la propuesta por P.J. Hansen, o la detallada descripción que aporta Beckton-Dickinson, y los problemas de cálculo de parámetros celulares que plantea empleando datos obtenidos a partir de un hemocitómetro, y otros protocolos para el contaje de células (en protocol-online)


1 se aseptiza el dedo con alcohol y luego se seca al aire o con algodón. Se coge entre el pulgar y el índice y se hace una punción rápida y penetrante a través de la piel de la punta del dedo con una lanceta estéril.
2. Se deshecha la primera gota de sangre y se aspira la siguiente con la pipeta de dilución perfectamente limpia y seca hasta la señal 1 o 0.5 (también puede utilizarse la pipeta de hemoglobina, de 20 microlitros). Hay que evitar la entrada de burbujas de aire, pudiendo ayudarnos de un papel de filtro para conseguir el enrasado.
3. A continuación se toma con la pipeta líquido de Hayem, isotónico con la sangre, hasta la señal 1; así, la sangre queda diluida al 1/10, si tomamos sangre hasta la señal 1, o al 1/20 si tomamos hasta 0.5. Esto es así porque el volumen de la bola de la pipeta es 100 veces superior al del capilar de la misma. (Si hemos utilizado la pipeta de hemoglobina podemos diluir su contenido en 2 o 4 ml de líquido de Hayem para obtener diluciones 1/100 o 1/200).
4. Tomamos la pipeta (o el tubo de ensayo) entre los dedos índice y pulgar y agitamos. A través de la goma de conexión con la pipeta, soplamos para despreciar las primeras gotas por corresponder al líquido que estaba en el capilar.
5. Se adapta un cubreobjetos sobre una cámara cuentaglóbulos limpia y seca y se coloca una gota en uno de los lados del cubre; esta gota penetra por capilaridad y rellena el retículo de la misma.
6. Una vez preparada la cámara se coloca sobre la platina del microscopio dejándose unos minutos en reposo para que sedimenten los glóbulos. Disponemos el condensador bajo y luz débil; enfocamos primero con el objetivo débil seco y luego se cambia al fuerte seco para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo. Finalizado el recuento se procede a la limpieza de la pipeta con acético 1:3, agua destilada y alcohol-éter sucesivamente.
7.El volumen de sangre en el cual se han contado las células resulta de multiplicar la profundidad de la cámara por el factor de dilución, la superficie de los cuadrados y el número de cuadrados contados.
Con cámara de NEUBAUER: Superficie de 1 cuadrado grande (1/20 mm de lado):
Volumen de un cuadrado grande (1/10 mm de profundidad):

Si contamos "a" glóbulos rojos en "n" cuadrados pequeños, el número de glóbulos por cuadrado será a/n.
Si en un volumen 1/4000 mm3 hay a/n glóbulos rojos, en 1 mm3 habrá X. Luego:
siendo X el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre diluida.
Si la sangre se diluyó a 1/100 o 1/200, habrá que multiplicar el valor X por 100 o 200 respectivamente, con lo cual obtendremos un nuevo valor, Y, que representa el número de glóbulos rojos existentes por cada mm3 de sangre (sin diluir).
Se utilizan para calcular, mediante el uso del microscopio, el número de partículas (leucocitos, hematíes, bacterias…) por unidad de voluimen de un líquido.
La cámara está constituida por una placa base de vidrio especial pareciso a un porta, su parte central se encuentra separada de los extremos por unas ranuras. en ella se encuentran las cuadrículas de recuento.
La fórmula de contaje es: partículas/mm3= partículas contadas.
Clases de cámaras:
- Neubauer improved: Es el más utilizado (9 cuadros grandes, cada 1 de 1 mm2.)
- Neubauer: La diferencia es el cuadro grande central.
- Thoma: Se utiliza solo para el recuento de eritrocitos.
- Fuchs-Rosenthal: Se utiliza habitualmente para recuento de células en líquidos orgánicos (LCR, Líquido sinovial…)

PRUEBAS SEROLOGICAS

PRUEBAS SEROLOGICAS:
La serologia se refiere al studio del contenido de anticuerpos en el suero. Ciertos microorganismos estimulan al cuerpo para producir estos anticuerpos durante una infección activa.
En el laboratorio, los anticuerpos reaccionan con los antígenos de formas especificas, de tal manera que se pueden utilizar para confirmar la identidad del microorganismo en particular.
Existen varias técnicas serológicas que se utilizan dependiendo de los anticuerpos de los cuales se sospecha entre los que se pueden mencionar aglutinación, precipitación, fijación del complemeto anticuerpos fluoresentes y otras.

ANTIGENOS FEBRILES:
Es un termino referido a un grupo de suspensiones bacterionas, representativos de un numero de bacterias patógenas para la especie humana y responsables de la aparición de infecciones que cursan con un cuadro frebil en el huésped infectado.
Estas medidas de diagnostico no son siempre de fácil aplicación y es ahí donde radica la importancia del uso de las suspensiones bacterianas en la detección de los anticuerpos presentes en el suero del paciente.
En el diagnostico clínico, los resultados obtenidos con el uso de los antígenos febriles deben ser considerados siempre en relación a los hallazgos clínicos y pruebas de laboratorio.

VDRL:
Es un examen de tamizaje para sífilis que pide los anticuerpos llamados reaginas, que pueden ser producidos por el treponema pallidum, la bacteria causante de dicha enfermedad.
Sin embargo, el cuerpo no siempre produce reagina específicamente en respuesta a la bacteria de la sífilis, por lo que el examen no siempre es preciso.

PRUEBA DE EMBARAZO:
Es una prueba que mide una hormona llamada gonadotropina corionica humana (GCH), producida durante el embarazo. Esta hormona aparece en la sangre y en la orina de las mujeres embarazadas hasta 10 dias después de la concepción.

CELULAS VEGETALES

LAS CELULAS VEGETALES
Estas forman parte de los tejidos y órganos vegetales.la presencia de los cloroplastos, de grandes vacuolas y de una pared celular que protege la membrana celular.La membrana celular es rígida, lo que determina las formas geométricas que encontramos en los tejidos vegetales, como el hexagonal observado en las células de la cubierta de la tela de la cebolla.

Células de la cebolla
Células de epidermis de la cebolla; son células eucariotas pluricelulares vegetales; son de forma alargada y bastante grandes.la membrana celular celulósica se destaca muy clara, teñida por el colorante. Los núcleos son grandes y visibles, en el interior de los mismos se puede llegar a percibir granulaciones, son los nucléolos. El citoplasma tiene aspecto bastante claro, en el se distinguen algunas vacuolas grandes, débilmente coloreadas; en algunas ocasiones se observa que la preparación tiene a manera de mosaico otros extractos de células que proceden de las capas mas internas que fácilmente han podido ser arrancadas al desprenderse la epidermis.

Células del tomate
Durante la observación en el microscopio y mediante una aguja histológica un fragmento de la parte interna del tomate, en la zona donde el tejido es compacto, se deposita este sobre un porta y presionando suavemente sobre el cubre se observan grandes células esféricas u ovoides en cuyo citoplasma pueden verse granulaciones anaranjadas que son los cromoplastos.Pueden verse también grandes vacuolas incoloras en células menos alteradas así como el núcleo.

Células de la lechuga
Las estomas poseen cloroplastos, estas se encuentran sobretodo en las partes aéreas del vegetal y especialmente en hojas, tallos normales y rizomas. Las células epidérmicas cubren las estructuras primarias dela planta. Su estructura es aplanada, con formas a menudo irregulares, interdigitadas, otras veces con formas mas regulares poligonales, sobre todo hexágonos.

REPORTE PRACTICA # 1

OBJETIVO:
Aprender a enfocar con diferentes objetos, primero con la camara de neubauer, luego de haber enfocado la camara de neubauer, comenzar con la cebolla, tomate, y hoja de lechuga para ver su estructura y saber enfocar cuidadosamente.

INTRODUCCION:
Este trabajo trata sobre como las células de la cebolla, lechugay tomate, sobre como son y como se llaman.
También como enfocar la cámara de neubauer y su utilización donde también utilizamos el portaobjetos para poder ver las células de dichos vegetales.

INDICE:
Objetivo ----------------------- 1
Introducción -------------------2
Índice --------------------------3
Marco teorico ------------------4
Bitácora-------------------------5
Conclusión ---------------------6
Ficha bibliográfica--------------7
Investigación ------------------8

MARCO TEORICO:
Esta practica consistió en enfocar el microoscopio y fue lo que hicimos al inicio. Luego tomamos muestras de tomate, lechuga y cebolla los cuales pusimos en el porta objetos y las cubrimos respectivamente con el cubre objetos.
Lo primero que observamos fue la cebolla y estaba rara eran alargadas las células.

Luego pusimos un pedazo de lechuga y se veía bolitas o círculos juntos como si fueran gotitas de agua unidas.

Después pusimos el tomate y fue el mas raro ya que se veía como hexágonos y tenia unos puntos rojos muy fuerte y fue ese el mas impresionante.




BITACORA:
ACTIVIDAD
MINUTOS
Entrada al laboratorio
5
Poner equipo de bioseguridad
15
Instrucciones
8
Tomar el material
10
Enfocar el microscopio
50
Enfocar muestra de cebolla
3
Enfocar muestra de lechuga
8
Enfocar muestra de tomate
2
Limpiar el material
3
Devolver el material
5
Quitarnos el equipo de bioseguridad
6

CONCLUSION:
Esta practica me gusto porque yo nunca había utilizado el microscopio, al inicio de la practica, se me hizo difícil al inicio porque me daba miedo descomponer o romper algo, pero agarre confianza y al enfocar el microoscopio me gusto y no se me hizo difícil ya habiendo hecho eso seguimos con las muestras de tomate, lechugay cebolla.
Eso me gusto mucho ya que nunca había visto algo asi.
Espero que las próximas practica sean mas interesantes y que me pueda desempeñar bien en el laboratorio clínico.

BIBLIOGRAFIA:
Wikipedia.com

INVESTIGACION:
Células de la cebolla: tienen las paredes celulares, muy distinguidos del resto de la celula, es en posiciones que se notan ordenadas a simple vista y son transparentes. Grandes vacuolas incoloras



Células de tomate:tiene una serie de granulas rojizas-anaranjadas que son los cromoplastos. En las células menos alteradas por la comprensión se ven gandes vacuolas incoloras.




Células de la lechuga: las células epidérmicas cubren las estructuras primarias de las plantas su estructura es aplanada con formas irregulares.



CAMARA DE NEUBAUER:
Se utiliza en cultivos para realizar conteos de células en un medio de cultivo liquido que consta de dos placas de vidrio entre las cuales se pueden alejar liquidos
Tiene una grilla de dimensiones y que es visible al microoscopio óptico.

MOLECULAS INORGANICAS

El agua (H2O) s el principal componente del organismo. Es el disolvente que permite el cumplimiento del fenómeno de osmosis mediante el cual se cumplen procesos fundamentales.

Las sales minerales son necesarias para la constitución de diferentes estructuras organicas y para diversas funciones.

Cloruro de sodio, potasio, yodo, hierro, calcio, fosforo y otras sales que son las que consumimos directamente.

El cloro es necesario para la elaboración de acido clorihidrico del tejido gástrico.

El sodio (Na) interviene en la regulación del balance hídrico provocando la retención de agua en el organismo.

El potasio(K) actua en el balance hídrico favoreciendo la eliminación de agua del organismo.

El yodo (I) es necesario para la glandula tiroides elabore la secreción hormonal que regula el metabolismo de los glúcidos.

El hierro (Fe) es imprescindible para la formación de globulos rojos.

El calcio (Ca) y el fosforo (P) son los que constituyen la parte inorgánica de los huesos.